А. Б. Эль Таалу, Е. Э. Перский, Ю. Г. Кот, Н. А. Никитина, М. В. Гоэнага Харьковский национальный университет им. В. Н. Каразина, пл. Свободы 4,Харьков,61077, Украина




Скачать 155.78 Kb.
НазваниеА. Б. Эль Таалу, Е. Э. Перский, Ю. Г. Кот, Н. А. Никитина, М. В. Гоэнага Харьковский национальный университет им. В. Н. Каразина, пл. Свободы 4,Харьков,61077, Украина
Дата публикации23.08.2013
Размер155.78 Kb.
ТипДокументы
shkolnie.ru > Химия > Документы
УДК 557.12.577.112:24.

РОЛЬ ПРОЦЕССИНГА В ВОЗРАСТНЫХ ИЗМЕНЕНИЯХ ТЕРМОСТАБИЛЬНОСТИ КОЛЛАГЕНА

А.Б.Эль Таалу, Е.Э. Перский, Ю.Г. Кот, Н.А. Никитина, М.В. Гоэнага

Харьковский национальный университет им. В.Н. Каразина, пл.Свободы 4,Харьков,61077, Украина, abbassido@mail.ru

Поступила в редакцию июня 2010 г.

Принята июня 2010 г.

In vitro изучена связь между степенью гидроксилирования пролила и окислительного дезаминирования ε-NH2-групп лизила и гидроксилизила в коллагене и термостабильностью его надмолекулярных структур в коже крыс линии Вистар в постнанатальном онтогенезе. Показано, что повышаясь к 3-месячному возрасту, содержание этих свободных ε-NH2-групп в коллагене остаётся в дальнейшем постоянным, в то время как содержание свободных СОН-групп, начиная с 1-месяца, неуклонно уменьшается с возрастом. В соответствии с этим межмолекулярное поперечное связывание в коллагеновых надмолекулярных структурах снижается в период от 1 до 3 месяцев, после чего постоянно повышается до 24 месяцев. Содержание гидроксипролина в коллагене непрерывно снижается в постнатальном онтогенезе. Совместное действие обоих эффектов приводит к снижению термостабильности надмолекулярных коллагеновых структур в коже в период от 1 до 3 месяцев с дальнейшим её ростом до 24 месяцев.

^ КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: возраст, коллаген, гидроксилирование, окислительное дезаминирование, поперечные сшивки, термостабильность, свободная энергия Гиббса.
THE ROLE OF PROCESSING IN AGE-RELATED CHANGES OF COLLAGEN THERMO-STABILITY

A.B. El-Ta’lu, Ye.E. Persky, V.G. Kot, N.A. Nikitina, M.V. Goenaga

^ V.N. Karazin Kharkov National University, Svobody Square 4, Kharkov 61077, Ukraine

abbassido@mail.ru

The connection between the degree of proline hydroxylation, oxidative desamination of ε-NH2-groups in lysine and hydroxylysine in collagen, and thermo-stability of the collagen sub-molecular structures in the skin of Wistar rats in post-natal ontogenesis, was in vitro studied. It was shown that, after an increase in these free ε-NH2-groups in collagen towards the age of 3-months, their content further remained constant while at the same time, the content of COH-groups steadily decreases with age, beginning from 1-month. Due to this, inter-molecular cross-linking in collagenous sub-molecular structures decreases from 1 to 3 months of age and afterwards, continuously rises up to the age of 24 months. The content of hydroxyproline in collagen continuously decreases during post-natal ontogenesis. The joint action of both effects leads to a decrease in the thermo-stability of collagenous sub-molecular structures in the skin from 1 to 3 months of age, with its further increase up to the age of 24 months.

^ KEY WORDS: age, collagen, hydroxylation, oxidative desamination, cross-links, thermo-stability, Gibbs available energy.
РОЛЬ ПРОЦЕСІНГУ У ВІКОВИХ ЗМІНАХ ТЕРМОСТАБІЛЬНОСТІ КОЛАГЕНУ

А.Б. Ель Таалу, Є.Е. Перський, В.Г. Кот., Н.А. Нікітіна, М.В. Гоенага

^ Харківський національний університет ім. В.Н. Каразіна, пл. Свободи 4, Харків , 61077, Україна, abbassido@mail.ru

In vitro вивчено зв'язок між ступенем гідроксилювання пролілу і окислювального дезамінування ε - NH2-груп лізилу та гідроксилізилу в колагені та термостабільністю його надмолекулярних структур в шкірі щурів лінії Wistar у постнатальному онтогенезі. Показано, що підвищуючись до 3- місячного віку, вміст цих вільних ε -NH2-груп в колагені залишається далі постійним, в той час, як вміст вільних COH—груп, починаючи з одного місяця, неухильно знижується з віком. У відповідності з цим міжмолекулярне поперечне зв’язування колагенових надмолекулярних структур знижується у період від 1 до 3 місяців, після чого постійно підвищується до 24 місяців. Вміст гідроксипроліну в колагені безперервно знижується у постнатальному онтогенезі. Сумісна дія обох ефектів призводить до зниження їх термостабільності надмолекулярних колагенових структур в шкірі у період від 1 до 3 місяців з подальшим її ростом до 24 місяців.

^ КЛЮЧОВІ СЛОВА: вік, колаген, гідроксилювання, окислювальне дезамінування, поперечне зв’язування, термостабільність, свободна енергія Гіббса.
Надмолекулярные коллагеновые образования являются одним из важнейших конструкционных элементов неминерализованных разновидностей соединительной ткани. Уровень структурной стабильности этих образований в значительной степени определяет её функциональные свойства, в первую очередь, механические.

На большей части постнатального онтогенеза структурная стабильность коллагеновых образований повышается, что рассматривается, как один из механизмов адаптации механических свойств соединительной ткани к увеличению массы и мышечной силы организма в процессе его роста и развития.

В начале постнатального онтогенеза существует, однако, небольшой период, когда структурная стабильность этих образований не увеличивается с возрастом, а уменьшается, после чего вновь непрерывно повышается в дальнейшем [1 - 3].

Это явление ещё не получило объяснения.

Естественно, что инверсия направленности возрастного изменения структурной стабильности надмолекулярных образований в начале постнатального онтогенеза должна быть следствием определённых изменений структуры молекул коллагена, которые происходят в этот период.

Одним из лучших тестов, с помощью которого можно оценить интегральную структурную стабильность коллагеновых образований, является уровень их термостабильности. Термостабильность коллагеновых структур определяется рядом факторов: стерическими характеристиками иминокислот и относительным содержанием в них гидроксипролина, гидратацией тройных спиралей молекул, наличием в них водородных, а также внутри- и межмолекулярных поперечных ковалентных связей [4 - 9].

Из всех этих факторов отчётливые возрастные изменения в коллагеновых структурах обнаружены только в степени их поперечного связывания и в содержании гидроксипролина [10, 11].

Оба эти структурных параметра являются результатом посттрансляционной модификации первичной структуры полипептидных цепей коллагена ферментами процессинга - пролилгидроксилазой и лизилоксидазой [1, 12].

Первый фермент гидроксилирует пирролидиновый цикл пролила в 4-м положении. Под действием второго происходит окислительное дезаманирование ε-NH2-групп лизила и гидроксилизила с превращением этих остатков в аллизил и гидроксиаллизил, содержащих, вместо ε-NH2-, альдегидные СОН-группы. В дальнейшем поперечные ковалентные связи образуются при взаимодействии либо двух СОН- групп (внутримолекулярные сшивки – альдоли, связь -С=С- ), либо ε-NH2-групп с СОН-группами (межмолекулярные сшивки – альдимины, связь –С=N-).

Целью этой работы было выяснение связи между степенью гидроксилирования пролила, а также окислительного дезаминирования ε-NH2-групп лизила и гидроксилизила и структурной стабильностью надмолекулярных коллагеновых структур в коже крыс на разных этапах постнатального онтогенеза.
^ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследования проведены на коллагене кожи крыс линии Вистар 1-, 3-, 12- и 24-месячного возраста. Образцы кожи массой около 800 мг брали со спины животных после их декапитации под тиопенталовым наркозом.

Для оценки термостабильности надмолекулярних коллагеновых структур очищенную от подкожно-жирового слоя и волосяного покрова кожу прогревали в дистиллированной воде при 600С (из расчёта 20 мг свежей ткани на 1 мл Н2О) в термостате УТ- 15.

Разрушение коллагеновых структур оценивали по их растворимости, измеряя количество гидроксипролина, вышедшего в раствор после 1, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 45, 60, 90 и 120 минут прогревания кожи. Степень растворимости рассчитывали, как количество гидроксипролина, вышедшего в раствор, к его начальному содержанию в образце и выражали в %.

По данным измерений строили зависимости степени растворимости коллагеновых структур от времени. Константы скорости определяли по тангенсу угла наклона соответствующих участков кинетических кривых на их полувысотах и рассчитывали свободную энергию Гиббса процесса разрушения коллагеновых структур по модифицированному уравнению Эйринга: ∆G = – RT ln (k’h / kT), где: ∆G – свободная знергия Гиббса; R– универсальная газовая постоянная; Т – абсолютная температура в градусах Кельвина; k’ – константа скорости процесса; h – постоянная Планка; k– постоянная Больцмана [13].

Для определения степени гидроксилирования пролила образцы кожи инкубировали в среде Рингера-Кребса, в присутствии 3Н-Pro (Amersham) c радиоактивностью 0,4 Мкк/мл в течение 6 часов при 37оС. Из проинкубированных образцов экстрагировали свежесинтезированный коллаген раствором 1М NaCl. О степени гидроксилирования прoлила в коллагене судили по отношению радиоактивностей {3Н-Hуpro /(3Н-Pro + 3Н-Hуpro)}×100%, которые измеряли на счётчике Beckman LC 7800 [14]. Погрешность определения составляла ± 5%.

Степень окислительного дезаминирования лизила и гидроксилизила оценивали по содержанию свободных ε-амино- и СОН- групп, которые измеряли в экстрактах коллагена методами [15] и [16], соответственно.

Аналитическое определение гидроксипролина в образцах проводили по методу [17].

Кривые, представленные на рисунке, являются типичными для серии повторных измерений (не менее 8 – 9 образцов в каждой серии).рений использовали

Полученные данные обрабатывали статистически с использованием программы Origin Pro 8.0.
^ РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

На рисунке приведены кинетические кривые выхода в раствор коллагена, разрушенного при нагревании в воде кожи животных разного возраста, а в таблице 1 – рассчитанные по этим кривым количественные параметры процесса разрушения.

Как видно, во всех возрастах кинетические кривые состоят из двух областей, характеризующихся различной крутизной.



Рис. Кинетика выхода в раствор разрушенного коллагена после прогревания кожи крыс разного возраста
Для объяснения этого явления отметим, что в надмолекулярных образованиях молекулы коллагена находятся на разных стадиях полимеризации и деструкции. Следовательно, эти образования занимают промежуточное положение между несшитыми и полностью сшитыми молекулами коллагена, входящими в состав надмолекулярных структур. В сущности, они представляют собой «скелет» из полностью сшитых поперечными сшивками молекул, соединённый с молекулами, недавно синтезированными или находящимися на стадии физиологической деструкции и слабо связанными с ним.

По-видимому, две области на кинетических кривых соответствуют процессам разрушения различных участков в надмолекулярных коллагеновых структурах

Первая область, более крутая, отражает денатурацию и выход в раствор денатурированных молекул коллагена, слабее связанных в надмолекулярных образованиях, в том числе, молекул, недавно синтезированных и находящихся на стадии деградации.

Вторая область на кинетических кривых, более пологая, отражает разрушение и выход в раствор частиц, представляющих собой более сильно связанные молекулы, синтезированные намного раньше и входящие в состав «скелета» надмолекулярных образований.


.

При качественном подобии кинетических кривых, они демонстрируют яркие возрастные особенности обоих процессов.

На первом этапе разрушения скорость денатурации коллагена, пропорциональная крутизне кинетических кривых, повышаясь в период от 1 до 3 месяцев, в дальнейшем непрерывно снижается до 24-месячного возраста животных. Таким же образом изменяется и время протекания первого этапа, измеряемая по точке перегиба кривых. В то же время свободная энергия Гиббса разрушения коллагеновых структур изменяется противоположным образом – она снижается от 1 до месяцев, после чего начинает повышаться и это повышение продолжается до 24-месячного возраста животных. ,
Таблица 1. Возрастные изменения параметров разрушения надмолекулярных коллагеновых образований при гидротермической обработке кожи крыс



Показатель

1 этап

2 этап

Возраст, мес.

1

3

12

24

1

3

12

24

Время,

мин

20,3 ±

0,5

18,0 ±

0,4*

23,4 ±

0,5*,**

27,2 ±

0,7*,**

102,6 ±

0,83

100,0 ±

0,75*

97,1 ±

0,68*,**

93,6 ±

0,66*,**

Степень,

%

45,5 ± 2,1

59,0 ±

4,0*

53,5 ±

3,2*

З9,5 ±

1,9*,**

61,5 ±

3,2

73,5 ±

З,9*

68,0 ±

3,8*

56,0 ±

2,8*,**

Константа

скорости,

с-1

(5,83 ±

1,17)

×10-2

(9,89 ±

1,81)*

×10-2

(З,33 ±

0,9)*

×10-2

(1,51 ±

0,4)*,**

×10-2

(1,98 ±

0,06)

×10-3

(1,87 ±

0,08)

×10-3

(1,92 ±

0,08)

×10-3

(2,05 ±

0,10)

×10-2

Свободная

энергия Гиббса,

кДж/моль


89,7 ±

0,6


88,1 ±

0,5*


91,2 ±

0,8*,**


93,4 ±

1,0*,**


98,8 ±

1,6


99,0 ±

1,6


99,0 ±

1,6


98,7 ±

1,6

Примечание. В таблицах 1 - 3: * - достоверно (р < 0,05) относительно контроля (1 мес.); ** достоверно - (р < 0,05) относительно предыдущего значения показателя.
На втором этапе ни скорость, ни свободная энергия Гиббса разрушения коллагена в коже не зависит от возраста животных. Это связано с тем, что прочность сформированного, полностью сшитого ковалентными химическими связями «скелета» надмолекулярных коллагеновых структур близка у животных независимо от их возраста.

Однако количество денатурированного коллагена, вышедшего в раствор на втором этапе разрушения, зависит от возраста животных, увеличиваясь в период от 1 до 3 месяцев и уменьшаясь затем к 24-месячному возрасту, как и на первом этапе гидротермической обработки кожи.

Это совпадение определяется тем, что при одинаковой скорости разрушения прирост вышедшего денатурированного коллагена постоянен и его суммарное количество зависит от числа разрушенных молекул, вышедших в раствор в конце первого этапа.

Таким образом, судя по полученным данным, структурная стабильность надмолекулярных образований матрикса в коже животных снижается в период от 1 до 3 месяцев, после чего начинает расти, Непрерывное повышение этого процесса продолжается до 24-месячного возраста.

Возрастные изменения степени гидроксилирования пролила и окислительного дезаминирования лизила и гидроксилизила приведены в таблицах 2 и 3.
Таблица 2. Возрастные изменения удельной радиоактивности 3Н-Pro и 3Н-Hуpro (имп/мин/мг коллагена) и степень гидроксилирования Pro в свежесинтезированном коллагене из кожи крыс (%).


Показатель

Возраст, мес.

1

3

12

24

3Н-Pro

892 ± 64

570 ± 43*

478 ± 41*,**

392 ± 35*,**

3Н-Hуpro

980 ± 51

601 ± 58*

413 ± 39*,**

310 ± 33*,**

{3Н-Hуpro /(3Н-Pro + 3Н-Hуpro)}×100%

52,4

51,3

46,4

44,2


Таблица 3. Возрастные изменения содержания свободных ε-NH2 – групп лизила и гидроксилизила и СОН-групп аллизила и гидроксиаллизила в свежесинтезированном коллагене из кожи крыс (мг/г коллагена)


Свободные

группы

Возраст, мес.

1

3

12

24

ε-NH2 -

11,66±0,7

24,69±2,2*

28, 13±2,8*

30,80±3,5*

СОН -

50,98±6,8

41,39±6,3

33,93±2,1*

28,67±3,9*,**


Как видно из приведенных данных, степень гидроксилирования пролила в свежесинтезрованном коллагене уменьшается с возрастом животных, что свидетельствует о снижении активности пролилгидроксилазы на всём протяжении их постнатального онтогенеза.

Аналогичным образом снижается с возрастом и активность лизилгидроксилазы. Действительно, в 1-месячном возрасте содержание альдегидных СОН-групп аллизила и гидроксиаллизила в свежесинтезрованном коллагене почти в 5 раз превышает содержание в нём ε-NH2 - групп лизила и гидроксилизила. В дальнейшем эта разница уменьшается и в 24 месяца содержание аминных и альдегидных групп становится практически одинаковым.

Свободные ε-NH2- и СОН-группы являются потенциальными предшественниками поперечных ковалентных сшивок. При этом вероятность их взаимной попарной конденсации зависит только от концентрации самих групп [9,12]. Поэтому в период от 1 до 3 месяцев поперечное связывание в коллагеновых надмолекулярных структурах должно происходить, в основном, за счёт взаимодействия СОН-групп друг с другом и образования альдолей - внутримолекулярных сшивок.

После же 3-месячного возраста, в результате снижения активности лизилоксидазы и увеличения удельного содержания ε-NH2 - групп лизила и гидроксилизила, в коллагеновых надмолекулярных структурах за счёт взаимодействия этих групп с СОН-группами преимущественно начинают образовываться межмолекулярные связи альдиминного типа.

Такая возрастная динамика активности ферментов процессинга коллагена объясняет инверсию изменений термостабильности коллагеновых надмолекулярных структур в коже в период от 1 до 3-месячного возраста.

Так, в период от 1 до 3 месяцев снижение интегральной термостабильности надмолекулярных коллагеновых образований в коже определяется как снижением содержания гидроксипролина в молекулах, так и незначительным образованием межмолекулярных сшивок, связывающих их в единое целое.

После 3-месячного возраста плотность поперечного межмолекулярного связывания молекул коллагена в надмолекулярных образованиях растёт, что и приводит к повышению их термостабильности как целого. Снижение же термостабильности индивидуальных молекул коллагена за счёт дальнейшего уменьшения в них содержания гидроксипролина перекрывается эффектом межмолекулярного связывания на надмолекулярном уровне.
ВЫВОДЫ

1. Структурная стабильность надмолекулярных коллагеновых образований, оцениваемая по скорости их разрушения и величине свободной энергии Гиббса при гидротермической обработке кожи крыс, снижается в период от 1 до 3 месяцев, после чего непрерывно повышается до 24-месячного возраста животных.

2. В основе этого явления лежит совместное действие двух эффектов процессинга: преимущественное образование в коллагене в период от 1 до 3 месяцев внутримолекулярных связей альдольного типа, а после 3-месячного возраста - межмолекулярных связей – альдиминов, при непрерывном снижении в постнатальном онтогенезе содержания гидроксипролина в коллагене.
^ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Никитин В.Н., Перский Е.Э., Утевская Л.А. Возрастная и эволюционная биохимия коллагеновых структур. – К.: Наукова думка.- 1977. – 242 с.

2. Обысов А.С. Надёжность биологических тканей. – М.; Медицина. – 1971. – 103 с.

3. Vogel M. G. Influence of maturation and ageing on mechanical and biochemical properties of connective tissue in rats // Mech. Ageing and Dev. – 1980. – Vol. 14, № 3. – 4. – P. 283 – 292.

4. Jenkins C.L., Raines R.T. Insights on the conformational stability of collagen // Nat. Prod. Rep. – 2002. – Vol. 19. – P. 49 – 59.

5. Berisio R., Vitagliano L., Mazzarella L., Zagari A. Crystal structure of a collagen-like polypeptide with repeating sequence Pro-Hyp-Gly at 1,4 A resolution: implications for collagen hydration // Biopolymers. – 2000 – 2001. – Vol. 56, № 1. – Р. 8 – 13.

6. Борискина Е.П. Энергии водородных связей, стабилизирующие конформацию гидратированных коллагеновых структур: Дис. канд. физ.-мат. наук. – Харьков.: - Харьковский национальный университет им. В.Н.Каразина. – 2007. – 147 с.

7. Berg R.A., Prockop D.J. The thermal transition of a non-hydroxylated form of collagen. Evidence for a role for hydroxyproline in stabilizing the triple-helix of collagen // Biochem. Biophys. Res. Commun. – 1973. – Vol. 152, № 1. – P. 115 – 120.

8. Nishi Y., Uchiyama S., Nishiuchi Y., Nakazawa T., Ohkubo T., Kobayashi Y. Different effects of 4- hydroxyproline and 4-fluoroproline jn the stability of collagen triple helix // Biochemistry. – 2005. – Vol. 44, № 16. – Р. 6034 – 6042.

9. Eyre D.R., Wu J.J. Collagen Cross – Links // Topics in Current Chemistry. – 2005. – Vol. 247. – P. 207 – 229.

10. Bailey A.Y., Paul R.G. The mechanisms and consequences of the maturation and ageing of collagen // Proc. Indian Acad. Sci. (Chem. Sci.). – 1999. – Vol. 111, № 1. – P. 57 – 69.

11. Перский Е. Э., Никитина Н.А., Наглов А.В., Кот Ю.Г. Возрастные особенности индукции синтеза и интенсивности некоторых стадий процессинга коллагена в соединительной ткани под действием механической нагрузки // Биологический вестник. – 2006 . – Т.10, № 2. – С. 126 – 129.

12. Yamauchi M., Masashi М. Post-translational Modifications of Proteins: Lysine Hydroxylation and Cross-linking of collagen // Tools for Functional Proteomics. – Series: Methods in Molecular Biology. – 2008. – Vol. 445. P. 95 – 108.

13. И. Клотц. Энергетика биохимических реакций.- М.: Мир.–1970.– 112 с.

14. Гарбузенко О.Б., Емец Е.Б., Перский Е.Э. Влияние деформации на обмен белков и механические свойства аорты и кожи крыс in vitro // Вестн. пробл. биол. и мед. - 1997. - № 25. - С. 12-18.

15. Бейли Дж. Методы химии белков – М.: Мир, 1965. – 284 с.

16. Дубинина Е.Е. Окислительная модификация белков плазмы крови больных с психиатрическими расстройствами // Вопр. мед. химии. – 2000. – №4. – С. 36 – 47.

17. Утевская Л.А., Перский Е.Э. Простой метод определения суммарного и свободного оксипролина // Вестн. Харьк. ун-та. – 1982. – № 226. – С. 18 – 20.

Похожие:

А. Б. Эль Таалу, Е. Э. Перский, Ю. Г. Кот, Н. А. Никитина, М. В. Гоэнага Харьковский национальный университет им. В. Н. Каразина, пл. Свободы 4,Харьков,61077, Украина iconЛещина Константин Александрович, 22 года
Харьковский национальный автомобильно дорожный университет, автомобильный факультет, специальность – «автомобили и автомобильное...
А. Б. Эль Таалу, Е. Э. Перский, Ю. Г. Кот, Н. А. Никитина, М. В. Гоэнага Харьковский национальный университет им. В. Н. Каразина, пл. Свободы 4,Харьков,61077, Украина iconОпыт работы с Интернетом и компьютером – 12 лет
Национальный технический университет "хпи" по специальности "Интеллектуальная собственность". г. Харьков
А. Б. Эль Таалу, Е. Э. Перский, Ю. Г. Кот, Н. А. Никитина, М. В. Гоэнага Харьковский национальный университет им. В. Н. Каразина, пл. Свободы 4,Харьков,61077, Украина iconХарьковский национальный университет радиоэлектроники
Показана возможность применения модели на реальных данных. Обоснована необходимость применения данной модели для прогнозирования...
А. Б. Эль Таалу, Е. Э. Перский, Ю. Г. Кот, Н. А. Никитина, М. В. Гоэнага Харьковский национальный университет им. В. Н. Каразина, пл. Свободы 4,Харьков,61077, Украина iconСвязь между возрастными изменениями белково-полисахаридного состава...
Связь между возрастными изменениями белково-полисахаридного состава и биомеханическими свойствами кожи
А. Б. Эль Таалу, Е. Э. Перский, Ю. Г. Кот, Н. А. Никитина, М. В. Гоэнага Харьковский национальный университет им. В. Н. Каразина, пл. Свободы 4,Харьков,61077, Украина iconГ. В. Павлов, д т. н., профессор
Национальный университет кораблестроения, пр. Героев Сталинграда 9, г. Николаев, 54001, Украина, 0506809828, 0512713298
А. Б. Эль Таалу, Е. Э. Перский, Ю. Г. Кот, Н. А. Никитина, М. В. Гоэнага Харьковский национальный университет им. В. Н. Каразина, пл. Свободы 4,Харьков,61077, Украина iconЕ. А. Селиванова Черкасский национальный университет, Украина
Ведь они их узнавали раньше только по тактильным признакам и не могут соотнести их со зрительными. Такому соотнесению их обучают...
А. Б. Эль Таалу, Е. Э. Перский, Ю. Г. Кот, Н. А. Никитина, М. В. Гоэнага Харьковский национальный университет им. В. Н. Каразина, пл. Свободы 4,Харьков,61077, Украина iconг. Харьков, Украина), в лице Генерального директора действующего...
Харьков, Украина, в лице Генерального директора действующего на основании Устава, именуемое в дальнейшем
А. Б. Эль Таалу, Е. Э. Перский, Ю. Г. Кот, Н. А. Никитина, М. В. Гоэнага Харьковский национальный университет им. В. Н. Каразина, пл. Свободы 4,Харьков,61077, Украина iconА. Г. Ющенко Институт радиофизики и электроники Национальной Академии...
Институт радиофизики и электроники Национальной Академии Наук Украины, улица академика Проскуры, 12, Харьков, 310085, Украина
А. Б. Эль Таалу, Е. Э. Перский, Ю. Г. Кот, Н. А. Никитина, М. В. Гоэнага Харьковский национальный университет им. В. Н. Каразина, пл. Свободы 4,Харьков,61077, Украина iconНик “Ускоритель” ннц хфти, Академическая, 1, Харьков 61108, Украина
Айзацкий Н. А., Кушнир В. А., Митроченко В. В., Пережогин С. А., Степин Д. Л., Ходак И. В
А. Б. Эль Таалу, Е. Э. Перский, Ю. Г. Кот, Н. А. Никитина, М. В. Гоэнага Харьковский национальный университет им. В. Н. Каразина, пл. Свободы 4,Харьков,61077, Украина iconПрограмма развития федерального государственного бюджетного образовательного...
«Нижегородский национальный исследовательский университет им. Н. И. Лобачевского»
Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2014
shkolnie.ru
Главная страница